Студопедия — Методы определения кетоновых тел в моче

6. Качественные реакции на кетоновые тела в моче:

а) проба Легаля

Метод основан на способности ацетона и ацетоацетата в щелочной среде образовывать с нитропруссидом натрия комплексы оранжево-красного цвета, превращающиеся при подкислении раствора в соединения вишнево-красного цвета. Проба более чувствительна к ацетоуксусной кислоте, чем к ацетону, с b-оксибутиратом реакция не идет.

В пробирку вносят 0,5 мл мочи, добавляют 0,1 мл нитропруссида натрия и 0,2 мл раствора гидроксида натрия, появляется оранжево-красное окрашивание. Вносят в пробирку 0,5 мл концентрированной уксусной кислоты. При наличии ацетоновых тел появляется вишнево-красное окрашивание. Если ацетон отсутствует, то при подкислении окрашивание переходит в желтое.

б) проба Либена

Метод основан на способности ацетона в щелочной среде образовывать желтый осадок йодоформа, обладающего специфическим запахом.

В пробирку вносят 1 мл мочи, добавляют 0,1 мл раствора гидроксида натрия и затем 0,1 мл раствора Люголя до слабо-желтой окраски раствора. При наличии ацетона жидкость мутнеет вследствие выделения бледно-желтого осадка йодоформа, обладающего характерным запахом.

7. Количественное определение кетоновых тел в моче с помощью тест- полосок «Кетофан»

Тест основан на реакции Легаля. Реактивная зона содержит щелочной буфер и нитропруссид натрия, который вступает в реакцию с ацетоацетатом или ацетоном, следствием чего является образование продукта, окрашенного в фиолетовый цвет. Интенсивность окраски прямо пропорциональна количеству кетоновых тел в пробе. Тест чувствителен к ацетоацетату, реагирует на его присутствие в моче в концентрации 0,3-0,5 ммоль/л. Тест менее чувствителен к ацетону и не чувствителен к β-оксибутирату.

Из пенала упаковки берут полоску, не прикасаясь руками к зонам индикации. Опускают полоску на 1-2 секунды в исследуемую жидкость, лишнюю жидкость удаляют, проводя полоской по краю сосуда, и через 1 минуту сравнивают со шкалой, находящейся на этикетке упаковки.

8. Качественная реакция на желчные пигменты — проба Гмелина с концентрированной азотной кислотой

Билирубин в моче при взаимодействии с концентрированной HNO3 окисляется. На границе раздела жидкостей (кислота–моча) появляются

продукты окисления в виде окрашенных колец: биливердин- зеленое, билицианин – синее, холетелины – от красного до желтого.

К 1мл мочи подслаивают 1 мл концентрированной азотной кислоты, так, чтобы жидкости не смешивались. На границе раздела двух сред при наличии билирубина появляются цветные кольца.

9. Количественное определение уробилиногена в моче с помощью тест- полосок «убГфан»

В основе реакции азосочетания стабилизированной диазониевой соли с уробилиногеном в кислой среде. Реактивная зона меняет цвет в присутствии уробилиногена на розовый или красный. Тест специфичен для всех уробилиногеновых тел. Чувствительность 3-4 мг/л (5,1 – 6,8 мкмоль/л).

Оценка теста: положительным считается тест при изменении цвета тест- зоны в течение первых 60 секунд. Эта окраска визуально сравнивается со шкалой, отдельные цвета которой соответствуют следующим концентрациям уробилиногена: 17 – 51 – 102 – 203 мкмоль/л.

Тест — полоску погружают в исследуемую мочу, затем высушивают на воздухе и сравнивают окраску индикаторной зоны с цветной шкалой.

КЕТОНОВЫЕ ТЕЛА

Кетоновые тела (син. ацетоновые тела) — группа органических соединений, являющихся промежуточными продуктами обмена жиров, углеводов и белков. Появление повышенных количеств Кетоновых тел в крови и моче является важным диагностическим признаком, свидетельствующим о нарушении углеводного и жирового обмена.

К Кетоновым телам относятся бета-оксимасляная к-та (см. Оксимасляные кислоты), ацетоуксусная кислота (см.) и ацетон (см.); они имеют сходное строение и способны к взаимопревращениям:

Обмен

Синтез Кетоновых тел (кетогенез) происходит гл. обр. в печени тремя путями: 1) конденсацией под действием тиолазы (ацетоацетил-КоА — тиолазы; КФ 2.3.1.9) двух молекул ацетил-КоА, образованного при бета-окислении высших жирных кислот (см.), или при окислительном декарбоксилировании (см.) пировиноградной кислоты (см.), к-рая может образоваться в процессе обмена глюкозы (см.) и ряда аминокислот (см. Трикарбоновых кислот цикл); 2) в результате синтеза ацетоуксусной к-ты из ацетоацетил-КоА, образованного непосредственно из четырех последних углеродных атомов, остающихся при последовательном окислении жирных к-т с длинной углеродной цепью; 3) в результате образования ацетоуксусной к-ты в качестве промежуточного продукта при окислении так наз. кетогенных аминокислот лейцина (см.), тирозина (см.), фенилаланина (см.) и в меньшей степени изолейцина (см.).

Читайте также:  Инструкция по применению препарата Боботик Что делать, если грудного ребенка мучают газы в кишечник

Основным путем синтеза К. т. считается первый, т. к. этот путь более других зависит от характера питания и в большей степени страдает при патол, нарушениях обмена веществ.

Из печени К. т. поступают в кровь и затем во все остальные органы и ткани (мышцы, почки, легкие и др.)» где включаются в цикл Трикарбоновых к-т, в к-ром окисляются до углекислоты и воды. К. т. используются для синтеза холестерина (см.), высших жирных к-т, фосфатидов (см.) и заменимых аминокислот (см.).

При повышенном содержании К. т. в крови (см. Ацетонемия) они выводятся почками (см. Ацетонурия), а также легкими в виде ацетона с выдыхаемым воздухом. Наиболее значительная гиперкетонемия наблюдается при диабетической (кетоацидотической) коме (см.).

При голодании (см.), одностороннем безуглеводистом питании и при недостаточной секреции инсулина (см. Диабет сахарный) подавляется использование ацетил-КоА в цикле Трикарбоновых к-т и в синтезе жирных к-т (через малонил-КоА), так как все метаболически доступные ресурсы организма превращаются в глюкозу крови. В этих условиях ацетил-КоА идет главным образом на образование оксиметилглутарил-КоА, что приводит к увеличению синтеза К. т. При приеме с пищей кетогенных аминокислот, некоторых белков и большого количества жиров (или усиленной мобилизации жира из жировых депо) происходит интенсивное образование ацетоацетил-КоА и К. т. Кетогенный эффект щелочных солей обусловлен активизацией превращения щавелево-уксусной к-ты (оксалоацетата) в аспарагин и альфа-кетоглутарата в глутамат, что приводит к нарушению функционирования цикла Трикарбоновых к-т. Введение с пищей углеводов приводит к усиленному образованию щавелево-уксусной к-ты, к-рая конденсируется с ацетил-КоА и тормозит образование К. т. Инсулин стимулирует синтез жирных к-т из ацетил-КоА и активирует использование последнего в цикле Трикарбоновых к-т, в результате чего снижается интенсивность синтеза К. т.

У здорового взрослого человека в сыворотке крови содержится 0,2— 2,5 мг% К. т. (в пересчете на ацетон), в эритроцитах концентрация К. т. меньше; с мочой за сутки выделяется 20—54 мг К. т. Такие концентрации К. т. не могут быть определены обычными методами, используемыми в клинике.

Кетонемия и кетонурия наблюдаются при сахарном диабете (повышен кетогенез и снижен кетолиз), углеводном голодании, лихорадках, общем голодании и истощении (повышен кетогенез), приеме богатой кетогенными веществами пищи (усилен кетогенез), при приеме значительных количеств щелочных веществ, при послеоперационных состояниях, гликогенозах I, II и VI типа (нарушен кетолиз), гиперинсулинизме, тиреотоксикозе, выраженных глюкозуриях, акромегалии, гиперпродукции гликокортикоидов (недостаток, усиленный расход или потеря углеводов), инфекционных болезнях (скарлатина, грипп, туберкулезный менингит и др.) и интоксикациях (напр., при отравлении свинцом) и др. Следствием кетонемии являются нереспирационный ацидоз (см.) и ацетоновое отравление (ацетон растворяет структурные липиды клеток), при которых нарушается транспорт глюкозы через биол, мембраны и резко угнетается деятельность ц. н. с.

Методы определения

Для определения К. т. предложено большое количество различных методов и проб, основанных на реакциях, специфичных либо для ацетона, либо для ацетоуксусной к-ты.

Основные группы методов используют реакции, специфичные для ацетона, напр, образование комплекса ацетона с бисульфитом, соединение с йодом, осаждение цианистой ртутью, осаждение сульфатом ртути, реакции с салицилальдегидом, динитрофенилгидразином, ванилином, о-нитробензоальдегидом и фурфуролом, а также реакции, специфичные для ацетоуксусной к-ты: реакции с нитропруссидом натрия, хлорным железом, резорцинолом, n-амидоацетофеноном. Основой большого числа методов количественного определения К. т. в крови и в моче является реакция с салициловым альдегидом.

Метод Нательсона (S. Natelson, 1961). Ацетон, вытесненный из крови или из мочи конц. серной к-той, образует с салициловым альдегидом в щелочной среде соединение красного цвета. Интенсивность окраски измеряют фотометрически. Ацетоуксусную к-ту предварительно превращают в ацетон нагреванием при 60° в кислой среде. Во внутреннее пространство чашки Конвея (см. Конвея методы) наливают 2 мл 2% р-ра бисульфита натрия, а во внешнее пространство— 1 мл цельной крови, смешанной с фтористым натрием для предотвращения свертывания, и 0,5 мл 10% р-ра серной к-ты. Чашку немедленно плотно закрывают крышкой, осторожно покачивают, чтобы перемешать кровь с серной к-той, и ставят в термостат при 60° на 1 час. За это время ацетоуксусная к-та превращается в ацетон, который диффундирует во внутреннее пространство чашки Конвея, где соединяется с бисульфитом натрия; 1,5 мл содержимого внутреннего пространства переносят в пробирку, добавляют 1,5 мл 40% р-ра едкого натра и 0,3 мл 20% (об.) р-ра салицилового альдегида в абсолютном спирте. Перемешивают, ставят на 20 мин. в термостат при 50°, затем на 30 мин. при комнатной температуре и колориметрируют при 540 нм против контрольной пробы. Контрольную пробу, в к-рую вместо крови вносят 1 мл воды, и стандартный р-р, содержащий 2 мг% ацетона, обрабатывают так же, как опытную пробу. Рассчитывают содержание ацетона исходя из величины экстинкции стандартного р-ра по формуле:

Читайте также:  Кифоз грудного и шейного отделов позвоночника лечение, упражнения, ЛФК

(экстинкция опытной пробы • 2)/ экстинкция стандарта = мг% ацетона.

Чтобы одновременно определить и бета-оксимасляную к-ту, т. е. сумму всех К. т., необходимо окислить ее до ацетоуксусной к-ты, а затем до ацетона.

Для этого 3 мл фильтрата сыворотки крови после осаждения белка вольфрамовой к-той помещают во внешнее пространство чашки Конвея и прибавляют 0,5 мл 10% серной к-ты и 0,5 мл 5% бихромата калия или натрия. Дальнейшее определение проводят, как описано выше.

В обычной практике для обнаружения Кетоновых тел применяют в основном качественные пробы. Они используются гл. обр. для исследования мочи. Преимущество этих гроб заключается в том, что они позволяют быстро, хотя и ориентировочно, выявить патологическое увеличение концентрации К. т.; при нормальном содержании К. т. эти пробы отрицательны. Наибольшее применение нашли нитропруссидные пробы, которые специфичны гл. обр. для ацетоуксусной к-ты и основаны на реакции К. т. с нитропруссидом натрия в щелочной среде с образованием соединения, окрашенного в красный цвет. Подобные соединения образуют и некоторые амины, напр, креатинин; однако в кислой среде аминные комплексы распадаются и окраска, обусловленная креатинином, исчезает, а окраска кетоновых комплексов сохраняется. На этом принципе основана проба Легаля (Е. Legal, 1883): к 4 мл мочи прибавляют несколько капель свежеприготовленного 5% р-ра нитропруссида натрия и 0,5—1 мл 10—15% едкого натра; образуется красное окрашивание. Добавляют для подкисления 0,5—1 мл конц. уксусной к-ты; при отрицательной пробе окраска исчезает — креатининовые комплексы распадаются, при положительной — сохраняется, причем создается впечатление изменения окраски, т. к. цвет креатининовых комплексов коричнево-красный, а кетоновых — вишнево-красный. Проба Ротеры (А. С. Н. Rothera, 1908) — самая чувствительная из нитропруссидных проб. Ротера отметил, что креатинин мешает реакции, если для подщелачивания используют едкий натр, но использование аммиака устраняет эти помехи. В пробирку наливают 5— 8 мл мочи и насыщают ее сухим сульфатом аммония, добавляют 2—3 капли конц. аммиака и 5 капель свежеприготовленного 5% р-ра нитропруссида натрия, встряхивают; при положительном результате образуется темно-красная или фиолетовая окраска. Существует микромодификация нитропруссидной пробы Ротеры, для проведения к-рой требуется всего несколько капель мочи с полуколичественной оценкой результатов в зависимости от интенсивности окраски [Фри и Фри (А. Н. Free, H. М. Free), 1958].

Из нитропруссидных проб широко применяется также проба Ланге (С. F. A. Lange, 1906): к нескольким мл мочи прибавляют несколько капель свежеприготовленного 10% р-ра нитропруссида натрия и 0,5—1 мл конц. уксусной к-ты, осторожно наслаивают несколько мл конц. р-ра аммиака. Проба положительна, если в течение 3 мин. на границе жидкостей образуется розово-фиолетовое кольцо.

На реакции ацетоуксусной к-ты с хлорным железом основана проба Герхардта (С. А. С. J. Gerhardt, 1865). Проба обычно рассматривается как недостаточно чувствительная: при ее помощи можно обнаружить приблизительно 25— 50 мг% ацетоуксусной к-ты (нитропруссидные пробы улавливают обычно 5—10 мг%). Р-р хлорного железа (10%) приливают по каплям к нескольким миллилитрам мочи до тех пор, пока не перестанет образовываться осадок фосфата железа, который отфильтровывают; к фильтрату добавляют еще несколько капель р-ра хлорного железа. При положительной пробе образуется фиолетовокрасное окрашивание. Салицилаты также дают положительную реакцию, поэтому для того, чтобы исключить окраску, вызванную салицилатами, проводят повторное определение с мочой, прогретой в течение 5 мин. в кипящей водяной бане; ацетоуксусная к-та при нагревании распадается, и окраска исчезает; салицилаты же дают положительную реакцию и после прогревания.

Читайте также:  О чём расскажет стул грудничка Служба медицинской профилактики Московской области

Реакций, специфичных для бета-оксимасляной к-ты, не описано. Применяемая для определения бета-оксимасляной к-ты проба Гардта предполагает предварительное окисление бета-оксимасляной к-ты при помощи перекиси водорода в ацетоуксусную и дальнейшее определение с нитропруссидом натрия: 20 мл мочи смешивают с 20 мл дистиллированной воды, подкисляют несколькими каплями 20% уксусной к-ты, кипятят, пока объем не уменьшится до 10 мл, доводят до 20 мл водой и разливают поровну в две пробирки. В одну добавляют 1 мл 30% р-ра перекиси водорода и нагревают в течение 1 мин. в кипящей водяной бане. К обеим пробам прибавляют по 10 капель ледяной уксусной к-ты и по 10 капель насыщенного на холоду р-ра нитропруссида натрия, размешивают, осторожно наслаивают 25% р-р аммиака. При наличии бета-оксимасляной к-ты в пробирке, в к-рую была прибавлена перекись водорода, появляется вишнево-красное кольцо.

Для экспресс-определения Кетоновых тел выпускаются специальные таблетки, состоящие из смеси сухих реактивов, и бумажные полоски, импрегнированные реактивами, в состав которых входит нитропруссид натрия. После погружения такой полоски (или таблетки) в исследуемую жидкость (мочу или плазму крови) в случае положительной реакции образуется фиолетовое окрашивание, интенсивность к-рого сравнивают со стандартной цветной шкалой.

Библиография:

Лейтес С. М. и Лаптева Н.Н. Очерки по патофизиологии обмена веществ и эндокринной системы, М., 1967; Ленинджер А. Биохимия, пер. с англ., М., 1976; Ньюсхолм Э. и Старт К. Регуляция метаболизма, пер. с англ., с. 355, М., 1977; Тодоров Й. Клинические лабораторные исследования в педиатрии, пер. с болг., София, 1968; Clinical chemistry, principles and technics, ed by R. J. Henry a. o., N. Y. a. o., 1974.

В. К. Городецкий; Л. М. Пименова (мет.иссл.).

Проба ланге на кетоновые тела

К кетоновым телам относят ацетон, ацетоуксусную и β-оксимасляную кислоты.

В норме с мочой выделяется 20–50 мг кетоновых тел в сутки. Кетоновые тела появляются в моче до того, как происходит значительное увеличение их концентрации в крови.
Для определения кетоновых тел используют:

  • унифицированную пробу Ланге;
  • пробу Ротеры;
  • готовые наборы для экспресс-анализа ацетона в моче, выпускаемые различными отечественными и зарубежными фирмами.

Унифицированная проба Ланге

Принцип метода . Нитропруссид натрия в щелочной среде реагирует с кетоновыми телами с образованием комплекса красно-фиолетового цвета.

Реактивы . 1) 5% раствор нитропруссида натрия (Na2[Fe(CN)5NO] × 2Н2O) готовят перед использованием; 2) концентрированная уксусная кислота; 3) 25% раствор нашатырного спирта (NH4OH).

Ход определения . В пробирку наливают 3–5 мл мочи, добавляют 5–10 капель нитропруссида натрия и 0,5 мл уксусной кислоты, смешивают и осторожно пипеткой по стенке пробирки наслаивают 2–3 мл нашатырного спирта.

Оценка результата . В течение 3 мин на границе сред образуется красно-фиолетовое кольцо-проба положительна.

Модифицированная проба Ротеры

Принцип тот же, что и в пробе Ланге.

Реактивы . 1) 5% раствор нитропруссида натрия — (Na2[Fe(CN)5NO] × 2Н2O) готовят перед использованием; 2) сульфат аммония (NH4)2SO4 (сухой); 3) 25% раствор нашатырного спирта (NH4OH).

Ход определения . Приблизительно 0,2 г сухого сульфата аммония, 5 капель мочи и 2 капли раствора нитропруссида натрия тщательно размешивают в пробирке, а затем на смесь осторожно наслаивают 10–15 капель 25% раствора NH4OH. При наличии в моче кетоновых тел на границе раздела сред образуется красно-фиолетовое кольцо, интенсивность окраски которого позволяет ориентировочно судить об их концентрации (см. таблицу «Ориентировочная количественная оценка кетоновых тел в моче»).

Ориентировочная количественная оценка кетоновых тел в моче

Интенсивность окраски Обнаруживаемые вещества, г/л
ацетоуксусная кислота ацетон
Следы 0,05 0,2
Умеренная 0,3 2,5
Интенсивная 0,8 8,0

Примечание . При низкой концентрации кетоновых тел бледноокрашенное кольцо может появиться через 8–10 мин.

Клиническое значение . Чаще всего кетонурия наблюдается при сахарном диабете. Она является критерием правильности подбора пищевого рациона: если количество вводимых жиров не соответствует количеству усваиваемых углеводов, то увеличивается выделение кетоновых тел.

Другими причинами кетонурии могут быть острые лихорадочные состояния; токсические состояния (рвота, понос), гастроинтестинальные расстройства, последствия анемии, запоры, длительное пребывание на холоде, большие физические нагрузки.

Дети особенно склонны к развитию кетонурии и кетоза. Кетоновые тела появляются в моче до того, как происходит значительное увеличение их концентрации в крови.

Ссылка на основную публикацию
Студопедия — В сосудистой рефлексогенной зоне
Мир психологии психология для всех и каждого Главная О нас История Команда Новости Сайт Пресса Дети Стихи детей Рассказы детей...
Стоматология Силикон на Молодогвардейской — отзывы, цены, врачи
Силикон, стоматологическая клиника отзывы Ваши отзывы не останутся незамеченными! Официальный представитель этой организации отвечает на отзывы на этом сайте. Очень...
Стоматология у метро Парнас, Санкт-Петербург — 15 мест �� (адреса, фото) HipDir
Метро парнас стоматология Основное правило нашей клиники - мы применяем только те материалы и технологии, в эффективности и надежности которых...
Студопедия — Методы определения кетоновых тел в моче
6. Качественные реакции на кетоновые тела в моче: а) проба Легаля Метод основан на способности ацетона и ацетоацетата в щелочной...
Adblock detector